단백질 정량분석법(Bradford assay)
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단백질 정량분석법(Bradford assay)

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수정일 2006.10.16 등록일 2006.10.16
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소개글

직접 실험한 내용을 보고서양식에 맞춰 작성한 실험보고서입니다. 직접 작성하였으므로 많은 도움이 될 듯 합니다.

목차

Ⅰ. Introduction (서론)

Ⅱ. Material & apparatus (실험기구)

Ⅲ. Method (실험방법)

Ⅳ. Resert (결과)

Ⅴ. Disccusion (토의)

Ⅵ. Reference (참고문헌)

본문내용

단백질 정량분석법(Bradford assay)
Ⅰ. Introduction
생물체를 건조시키면 수분이 빠져나가 탄소, 산소 그리고 수소가 서로 결합되어 형성된 단백질, 탄수화물, 지방 그리고 핵산만 남는다. 이것들이 서로 결합하여 생명체의 기본 단위인 세포를 형성하는 것이다. 이 중에서 단백질 분자는 분자량이 인슐린과 같이 5,000에서부터 담배모자이크 단백질과 같은 4,000만에 이르는 것도 있다. 단백질은 아미노산이 펩티드결합(Peptide bond)에 의하여 서로 결합되어 있는데 경우에 따라 탄수화물, 지방, 핵산 그리고 햄(Heme)등이 결합하여 복합 단백질(Conjugated protein)을 이루고 있다. 단백질은 20여 가지의 아미노산들이 무한히 다양하게 결합되어 있고 단백질의 크기, 구조 그리고 물리적 특성의 다양성을 보여주고 있기 때문에 각 단백질 분자는 각각 특수한 기능에 맞는 화학적 성질을 갖고 있는 것이다. 따라서 단백질처럼 생체의 여러 가지 기능을 수행 할 수 있는 다양성을 지니고 있는 물질은 없다. 특히 단백질은 생체막이나 세포기관의 중요한 부분, 효소, 호르몬 그리고 항체 등을 형성하고 있다. 이와 같은 생물학적 중요성 때문에 단백질을 잘 알아두어야 한다. 단백질의 아미노말단기(-NH2)와 카르복시말단기(-COOH)는 안일 아미노산의 아미노기와 카르복시기의 그것과 동일하게 화학반응을 하기 때문에 전기 영동법(Electrophoresis)이나 크로마토그래피(Chromatography) 방법은 복잡한 단백질을 분리하는 데 널리 쓰이고 있다.
단백질 정량분석에는 여러 가지 방법이 있다. 뷰렛 시험 (biuret test)은 두개 이상의 펩티드 결합을 가지고 있는 화합물들은 알칼리성 용액에서 묽은 황산구리로 처리하면 자주색을 띠는 물질을 생성한다. 색깔은 구리원자와 두 개의 펩티드 사슬에서 오는 네 개의 질소원자들 사이에서 배위화합물이 형성됨으로써 생기는 것으로 생각되고 있다. 뷰렛 시험은 모든 단백질에 대해서 재현성이 꽤 좋으나 비교적 많은양(1~20mg)의 단백질을 정량하는 데 쓰이는 방법이다.
Lowry 시험(Folin-Ciocalteau) Lowry등이 고안한 이 단백질 정량분석법은 용액에 있는 단백질뿐 아니라 건조된 시료에도 이용될 수 있다. 특히 이 정량방법은 5ug/ml정도의 단백질 양을 정량할 수 있는대단히 민감한 방법이어서 널리 쓰이고 있다. 이 Lowry 방법에서 사용하는Folin-Ciocalteau시약에 의한 발색은 뷰렛 시험에서와 마찬가지로 단백질과 알칼리성구리와의 반응과 단백질에 있는 티로신과 트립토판 들에 의한 환원반응으로 생긴다.

두 아미노산의 함량은 단백질의 종류에 따라서 상당히 다르므로 1mg의 단백질에 대한 색의 세기가 일정하지가 않다. 표준곡선을 결정하는 데 사용한 단백질이 나타내는 색의 세기와 다를 수 있다. 그럼에도 불구하고 이 방법은 단백질을 정제하는 과정에 있어서 단백질의 함량변화를 측정하는 데는 매우 유용한 방법이다.
분광학적 정량법은 단백질에 있는 티로신, 페닐알라닌 및 트립토판 잔기들은 각각 275nm와 280nm의 자외선을 흡수한

참고문헌

(1) 효소 단백질 정제법. 안용근. 양서각. 1994. 63~70쪽
(2) 실험생화학. 한국생화학회. 탐구당. 1986. 230~231쪽, 255~257쪽
(3) Chemistry Principles & Reaction. Masterton & Hurley. Saunders College Pub. 333~337쪽
(4)http://100.empas.com/entry.html/?i=42522&
(5)http://moolynaru.knu.ac.kr/everyday_science/sangmyung/01hubsoo_basul_mooljil
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