[영양생화학 실험] 분광광도계의 원리 및 이용 : 분광광도계의 원리를 알고 흡광도를 측정하여 각 파장에 따른 그래프를 그릴 수 있고, 파장과 농도, 흡광도의 관계에 대하여 알 수 있다

분광광도계의 원리 및 이용

Purpose

Introduction

Meterials

Method

Result

Discussion

Summary

Reference

[영양생화학 실험] 분광광도계의 원리 및 이용 : 분광광도계의 원리를 알고 흡광도를 측정하여 각 파장에 따른 그래프를 그릴 수 있고, 파장과 농도, 흡광도의 관계에 대하여 알 수 있다
Purpose
분광광도계의 원리를 알고 흡광도를 측정하여 각 파장에 따른 그래프를 그릴 수 있고, 파장과 농도, 흡광도의 관계에 대하여 알 수 있다.

Introduction
분광 분석법은 화합물이 흡수 또는 방출하는 전자기 복사선의 파장과 흡수 또는 방출의 정도를 측정하여 화합물의 농도를 알아내는 방법이다. 분광 분석법의 측정 장치로는 분광광도계가 있는데, 분광광도계는 크게 광원, 단색화 장치, 검출기로 구성되어 있다. 광원에는 텅스텐 램프, 중수소 아크 램프, 글로바, 헬륨-네온 레이저, 레이저 다이오드 등이 있다. 단색화 장치는 빛을 각성분 파장으로 분산시키고 좁은 띠의 파장을 선택하여 시료 또는 검출기로 보낸다




　≪ … 중 략 … ≫




Method
1.색소의 흡수 스펙트럼
①분광광도계를 10분 정도 warm up 시킨다.
②각 색소의 흡광도를 420nm에서 시작하여 700nm까지 20~30nm 간격으로 차례로 측정한다. 파장을 바꿀 때마다 큐벳에 증류수를 넣고 흡광도를 0으로 맞춘 후 시료의 흡광도를 측정한다.
2.농도 차에 따른 흡광도 변화
①시험관을 준비하여 한 가지 색소에 대하여 다음과 같이 여러 농도의 용액을 만든다.
.
시험관 번호
Bromophenol blue(mL)
Methyl orange(mL)
1
1
4
2
2
3
3
3
2
4
4
1
5
5
0
②실험 6-1에서 얻은 bromophenol blue의 최대 흡수를 나타내는 파장에서 증류수로 흡광도를 0으로 맞춘 후, 각 시험관의 흡광도를 측정한다.
③위의 실험을 methyl orange에 대해서 되풀이 한다.
Result
1.색소의 흡수 스펙트럼
Bromophenol blue
Mehtyl orange
파장(nm)
흡광도(A)
흡광도(A)
420
440
470
1.878
490
1.962
510
2.045
530
0.298
1.984
550
0.471
2.154
570
0.687
0.972
590
0.994
610
0.481
630
0.082
650
670
700
①각 파장에 대한 흡광도를 그래프로 그려 최대 흡수를 나타내는 파장을 구한다.
bromophenol blue의 최대 흡수 파장은 590nm,
methyl orange의 최대 흡수 파장은 550nm이다.
②각 색소의 몰 흡광계수 E를 구하여 본다.
Bb의 흡광계수
흡광도A=e*c*l이므로
흡광계수e=
흡광도A는 최대값인 0.994
투과길이l은 1cm
농도c의 단위는 M로 바꿔주어야 하는데
Bb의 농도는 1mg/dl이므로 0.01

강의자료 참고
박병빈 외 7인, 『일반화학실험』, 자유아카데미, 2007, 205~206쪽
화학교재연구회, 『일반화학실험』, 사이플러스, 2010, 146쪽